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使用CSA技術的技巧

發布時間: 2015-10-26  點擊次數: 795次

在使用CSA技術時,也應注意某些組織細胞內內源性過氧化物酶、內源性生物素的干擾。內源性過氧化物酶可用0.3%~3%H202抑制其活性。  在使用CSA技術時,也應注意某些組織細胞內內源性過氧化物酶、內源性生物素的干擾。內源性過氧化物酶可用0.3%~3%H202抑制其活性。

  標記的雜交探針或抗體的非特異性結合,以及其他目標探針的非特異性結合放大,都可給實驗的分析帶來困難。因為CSA技術的顯著放大能力,對非特異性結合的信號也具有放大作用。

  但因為CSA具有*的敏感性,因此抗體和核酸探針可稀釋到相當高的濃度,在目標物達到飽和所需的濃度以下,這樣非特異性背景染色將大大降低或消失,而且稀釋度的提高還可節約昂貴試劑的用量。

  哺乳動物細胞和組織內含有生物素依賴的羧基酶,它是許多功能代謝必需的。當使用生物素鏈霉親和素檢測系統時,這些含有生物素的酶產生很強的背景信號。在使用時應預先封閉組織細胞內的內源性生物素。

  生物素化酪胺酰胺與HRP酶促反應后,加熱可改進CSA檢測敏感性。在孵育液中加入增加黏性的葡萄糖硫酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮(poly-vinyl pyrrolidone,PVP)可降低苯氧基原子團中間體的擴散,使信號定位更為準確。也有文獻報道證明在使用標記的酪胺酰胺時,直接用HRP標記探針對于降低非特異性結合尤其有用。  北京富瑞恒創科技有限公司。

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